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Chromatographie echangeuse d'ion proteine


chromatographie echangeuse d'ion proteine

Grâce à cette méthode, lls ont pu déterminer le site actif de la Ribonucléase bien avant que l'on puisse établir sa structure tridimentionnelle.
La lecture de la conductance G est donnée en Siemens (S ou plutôt en microSiemens (S) car les solutions sont généralement diluées.
Si un échantillon avec les anions A- et B- est injecté dans la colonne, on échange ces anions par des anions compétiteurs de la colonne selon le processus d'équilibre réversible donné par les équations suivantes 6 : Résine-NR3 E- A- k1 Résine- NR3A- E- Résine-NR3. Elle évolue rapidement dans sa détection pour aller vers une détection plus sensible des ions par leur conductance électrique.Une considération importante pour les expériences réaction chimique par échange de protons ts déchange ionique est le pH des tampons.En règle générale, un grand nombre de fractions consécutives sont collectées.Une application courante de la chromatographie sur colonne de chromatographie liquide à haute performance, soit hplc.Quand une solution protéique non purifiée traverse la colonne, la protéine désirée se lie à l'effecteur, tandis que les autres composants sont élués.Après la colonne, une seconde colonne déchange dions est placée, il sagit du suppresseur.Un échangeur de cations sera généralement fonctionnalisé avec des groupes chargés négativement tels que des groupes sulfonates, carboxylates ou phosphonates.
La mémoire tampon doit avoir faible conductivité, chargée des espèces ne peuvent rivaliser avec léchantillon pour les interactions avec la résine.
Les analytes cibles doivent alors être détectés par différents moyens, typiquement par la conductivité ou par absorbance UV / visible.
Pour amplifier ces différences, on utilise des échangeurs à faible capacité, ce qui permet dutiliser des solutions diluées déluant.
Au-dessus de la pI, il aura une charge nette négative, tandis quau-dessous de la pI, il aura une charge positive nette.
Principe: Cette méthode repose sur la différence d'interraction entre les molécules chargées à séparer et la phase stationnaire.À linverse, le cytochrome C est chargé positivement à un pH de 8,1 et se lie à la colonne.Il ne prend pas en compte la structure tridimensionnelle de la protéine.Cependant, un acide faible avec un pKa supérieur à environ 6 ne pourra pas être détecté avec un détecteur de conductivité muni dun suppresseur parce que tous les anions seraient convertis en acide par celui-ci.L'éluant modifier modifier le code Léluant porte léchantillon de la boucle dinjection jusquà la colonne.Les analytes cibles (anions ou cations) sont retenus sur la phase stationnaire, mais peuvent être détachés de celle-ci en ajoutant une espèce de charge similaire dans léluant.Ils sont classés en 'échangeurs d'anions' er 'échangeurs de cations'.À un pH égal à pI de la protéine, la protéine est neutre.


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